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原代心肌細胞間的培養都有哪些抗污染措施?

發布時間: 2022-11-09  點擊次數: 888次
  成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁,具有分裂增殖能力。差異貼壁后,原代心肌細胞間中仍有少數成纖維細胞混雜,如果處理不當,很容易長成優勢細胞。溴脫氧尿苷(BrdU)可以干擾細胞有絲分裂,因此BrdU常規用于抑制成纖維細胞的生長。但如果用胎牛血清培養細胞,由于胎牛血清含有很多促有絲分裂因子,BrdU很難抑制成纖維細胞的生長。使用小牛血清可以克服這種現象,獲得90%以上的心肌細胞。
  
  觀察原代心肌細胞間形態時,接種密度低,貼壁心肌細胞數量減少。為了防止存活的心肌細胞隨著液體的更換而被丟棄,液體的更換應在接種48小時后進行。這不僅會顯著增加貼壁心肌細胞的數量,還會使BrdU需要更長的時間來抑制成纖維細胞。另外,其和0.1gL1BSA能為心肌細胞提供營養支持,但對心肌細胞的黏附率和凋亡率無明顯影響。
  
  除無菌操作等常規技術方法外,還應特別注意以下幾點:獲取心臟時,避免切開消化道。比較安全的方法是切開劍突上肋,不涉及腹腔,減少污染機會。在條件允許的情況下,避免新生大鼠心肌細胞與其他細胞在同一培養箱中共培養,防止交叉污染。培養心肌細胞的觀察。
  
  原代心肌細胞間培養液適宜的pH范圍為7.2~7.4。配制和使用培養基時,應注意:
  
  1、過濾后pH值會增加0.1~0.3。
  
  2、培養基中加入血清后,pH值會降低,降低的程度與血清的質量和含量有關。
  
  3、及時更換液體。
  
  4、配制好的培養液不宜在4℃下長期保存。這是因為培養液中的CO2會溢出,培養液的pH會升高。每種配制好的培養液應盡可能在2周內用完,否則應部分保存在-20℃下。使用前要補充谷氨酰胺和碳酸氫鈉,再次過濾后才能使用。
  
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